如何利用好慢病毒感染的原理和特点？

一、原理

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

二、特点

1） 直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 

2） 可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

3） 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。

4） 无需任何转染试剂，操作简便。

5） 可以根据客户需要制备多种标记。

三、慢病毒包装简要流程：

1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。

2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。

3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

4） 病毒的纯化和浓缩。

5） 分装、- 80 ℃保存。

6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。