慢病毒转染贴壁细胞实验方法

1.提前一天细胞铺板

提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。

2. 感染实验

⑴将Envirus^TM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。

⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。

注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据常规用量，建议进行和增强剂配合的梯度实验。

⑶将增强剂稀释液和病毒稀释液充分混合，4℃静置15分钟。

⑷上述混合液加入到含完全培养基的细胞上，37℃培养8小时后观察细胞状态，如没有明显变化，不要更换培养基，继续培养24小时后常规更换培养基。由于慢病毒感染较慢，一般在感染96小时后观察结果。

表1 不同细胞培养容器推荐用量

细胞培养容器	表面积(cm2)	表面积相对于24-well比率	每孔EnvirusTM-LV用量	每孔稀释液用量	每孔培养基总量
96-well	0.3	0.2	0.5-1.5μl	10μl	100μl
48-well	0.7	0.4	1-3μl	15μl	200μl
24-well	1.9	1	2.5-7.5μl	25μl	500μl
12-well	3.8	2	5-15μl	25μl	1ml
6-well/35-mm	10	5	10-30μl	50μl	2ml
60 mm/T25 flask	21	10	25-75μl	125μl	5ml
100 mm	58	30	75-225μl	250μl	15ml