细胞转染效率影响因素

1.组织培养试剂

优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。

基础培养基—目前所使用的各种市售培养基$\mathrm{如}，RPMI1640\mathrm{和}DMEM$。培养基的成分包括营养物质$\mathrm{氨}\mathrm{基}\mathrm{酸}，\mathrm{葡}\mathrm{萄}\mathrm{糖}$，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。另外，血清，添加剂，来自于培养箱内的污染物、化学物质，或真菌/细胞的污染也都可能影响到细胞生理。

2.细胞生长状态

密切观察您的细胞;确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。

增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的最重要的变量。

此外，还常用促有丝分裂刺激物$\mathrm{如}，\mathrm{病}\mathrm{毒}\mathrm{转}\mathrm{化}，\mathrm{生}\mathrm{长}\mathrm{因}\mathrm{子}，\mathrm{条}\mathrm{件}\mathrm{培}\mathrm{养}\mathrm{基}，\mathrm{以}\mathrm{及}\mathrm{滋}\mathrm{养}\mathrm{细}\mathrm{胞}$来活化原代培养细胞。

贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。天生趋于悬浮的细胞$\mathrm{如}HL60，Jurkat$非常难以转染。相反，天生为贴壁的细胞$\mathrm{如}HEK，CHO$则可适应悬浮生长的条件。

3.载体DNA

检查纯化所得的载体质量。确定支持其正常功能的基因序列是否适合于您的细胞体系。在对您细胞体系的参数进行测定时，一定要选用一种您已知具有功能的对照载体。

载体的完整性—种载体是否具有功能取决于它结构的完整性。转染效率受到质粒制备物的超螺旋结构和舒展结构之间比例、双螺旋中断、核酸酶的降解，以及来自于储存和处理过程中的物理压力的影响。

4.转染方案

转染复合物的制备—诸如转染试剂/DNA配比，离子强度，缓冲液pH值，以及温度等变量都会影响到转染复合物的组成和功能。质粒既可在无菌水又可在TE缓冲液中稀释。如果您要使用一种市售的转染试剂，就应当仔细阅读该试剂所提供的使用说明。需要对试剂提供方给予一定的信赖;除非您有很好的理由支持您做出改变，否则就应当严格按照他们所推荐的转染方案。在不含血清或其他蛋白的培养基中制备转染复合物;如果制备复合物所使用的培养基含有血清，它就会对转染产生抑制。推荐使用Entranster试剂，培养基可加抗生素和血清，有助于提高转染效率。