英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.提前一天细胞铺板
提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。
- 感染实验
⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。
⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。
注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据常规用量，建议进行和增强剂配合的梯度实验。
⑶将增强剂稀释液和病毒稀释液充分混合，4℃静置15分钟。
⑷上述混合液加入到含完全培养基的细胞上，37℃培养8小时后观察细胞状态，如没有明显变化，不要更换培养基，继续培养24小时后常规更换培养基。由于慢病毒感染较慢，一般在感染96小时后观察结果。
表1 不同细胞培养容器推荐用量
| 细胞培养容器 | 表面积(cm2) | 表面积相对于24-well比率 | 每孔EnvirusTM-LV用量 | 每孔稀释液用量 | 每孔培养基总量 |
| 96-well | 0.3 | 0.2 | 0.5-1.5μl | 10μl | 100μl |
| 48-well | 0.7 | 0.4 | 1-3μl | 15μl | 200μl |
| 24-well | 1.9 | 1 | 2.5-7.5μl | 25μl | 500μl |
| 12-well | 3.8 | 2 | 5-15μl | 25μl | 1ml |
| 6-well/35-mm | 10 | 5 | 10-30μl | 50μl | 2ml |
| 60 mm/T25 flask | 21 | 10 | 25-75μl | 125μl | 5ml |
| 100 mm | 58 | 30 | 75-225μl | 250μl | 15ml |