小鼠大脑皮层神经元原代细胞培养步骤

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤：
1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑；
2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块；
3、  移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min；
4、  将皮层组织碎块移入离心管，弃去剩余消化液，用接种液洗3次，每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底，弃去上清液；
5、  最后再用接种液1ml混悬，反复吹打（巴氏吸管）混悬液中组织块，力度适中，至浑浊后将上清液移入培养瓶待用；
6、  加入1ml接种液后再次吹打，如此反复3-4次，组织块逐渐消化后，弃去最终残块；
7、  收集含单细胞悬液的上清液约4-5ml于培养瓶中，以接种液重新悬浮细胞，细胞记数；接种1×107个细胞于6孔培养板中；
8、  培养24h至细胞贴壁后，换全培养液（DMEM/F12+2%B27，engreen）培养3d，观察神经元生长状况；
9、  换用阿糖胞苷培养液(终浓度2.5ug/ml，换半液)培养3d以抑制神经胶质细胞及杂细胞生长，获得单纯培养的原代神经细胞；
10、  每隔3d换全培养液1次，每次换半液。