首先siRNA由于只 …
阅读更多 »慢病毒滴度的计算
实验准备 目标细胞:选择适合慢病毒感染的细胞株(如 HEK293T 或靶细胞)。 病毒稀释:对病毒原液进行一系列梯度稀释(如 10−1,10−2,10−3,10−4)。 感染细胞:将稀释后的病毒感染到目标细胞中,确保设置对照组(未加病毒)。 培养:培养 48-72 小时(根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整)。 检测方法:检测报告基因表达水平(如荧光蛋白 …
阅读更多 »细胞培养的质量好坏是 …
阅读更多 »实验准备 目标细胞:选择适合慢病毒感染的细胞株(如 HEK293T 或靶细胞)。 病毒稀释:对病毒原液进行一系列梯度稀释(如 10−1,10−2,10−3,10−4)。 感染细胞:将稀释后的病毒感染到目标细胞中,确保设置对照组(未加病毒)。 培养:培养 48-72 小时(根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整)。 检测方法:检测报告基因表达水平(如荧光蛋白 …
阅读更多 »细胞类型: 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如,一些细胞对病毒更敏感,需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系(如HEK293T):种植密度可稍低; 难感染细胞系(如原代细胞):需要更高密度。 病毒滴度: 如果病毒滴度高,细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低,建议适当提高种植密度,并配合 增强试剂(如Polybrene) 提高感染效率。 感染目标: 如果 …
阅读更多 »在慢病毒感染实验中,12孔板中种植的细胞密度需要根据以下因素优化: 一般种植密度建议: 悬浮细胞: 每孔种植 1×10⁵ 至 2×10⁵ 个细胞。 贴壁细胞: 每孔种植 5×10⁴ 至 1×10⁵ 个细胞。 对于贴壁细胞,建议种植后培养 24小时,让细胞达到约 30%-50% 的汇合度(confluency),然后进行病毒感染。这种密度能确保细胞有充足的分裂 …
阅读更多 »在基因转染实验中,共转染的两种质粒通常不一定需要选择不同的载体,但有一些情况下选择不同的载体可能会更有优势: 同源重组和重复序列问题:如果两个质粒使用相同的载体序列,可能会发生同源重组,导致质粒结构不稳定,尤其是在细菌扩增和分离时。这种情况下,选择不同载体可以降低同源重组的风险。 抗性筛选:如果需要通过抗生素筛选两种质粒,最好选择含有不同抗性基因的载体,以便 …
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